高致病性豬繁殖與呼吸綜合征防控技術研究進展武華華威特.pdf

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1、華威特（江蘇）生物制藥有限公司 武華博士2023年3月23日第十一屆李曼中國養豬大會暨世界豬業博覽會母豬 流產、死胎、木乃伊、弱仔、不發情或返情率高等繁殖障礙 斷奶后仔豬死亡率高育肥豬 高熱、死亡、降低飼料利用率 增加治療費用 免疫抑制導致繼發感染或混合感染嚴重危害養豬業、獸藥企業，包括化藥、中藥、消毒劑、活疫苗、滅活疫苗都要與PRRS沾邊，或與凈化聯系起來。藍耳病是經濟疾病，豬場降本增效必須首先控制該??！藍耳病仍然是當前豬病第一大危害藍耳病疫苗是最經濟、有效的控制手段 使用安全、有效的疫苗，制定科學免疫程序，可以有效控制藍耳??；接種疫苗可迅速建立群體免疫力，提高群體免疫效果；減少抗生素等藥物

2、用量，降低藥物殘留，保障食品安全。藍耳病疫苗是最經濟有效控制手段 經典PRRS活疫苗 VR2332株 CH-1R株 R98株 高致病性PRRS活疫苗 湖南株（HuN4-F112株）江西株（JXA1-R株）天津株（TJM-F92株 廣東株（GDr180株）嵌合活疫苗 PC株 活疫苗高致病豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（CH-1a株）豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（M-2株）滅活疫苗藍耳活疫苗選經典株還是變異株？CH-1R株,303,11%R98株,336,12%VR-2332株,254,9%JXA1-R株,692,26%TJM-F92株,522,19%H

3、uN4-F112株,135,5%GDr180株,49,2%PC株,81,3%CH-1a株,353,13%M-2株,8,0%藍耳疫苗2018-2022近5年累計批簽發數據目前市場上是藍耳活疫苗與滅活疫苗、高致病性豬藍耳病活疫苗TJM-F92株與經典毒株疫苗的博弈；關于停止生產豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）的函 2007年核發滅活疫苗（NVDC-JXA1株）臨時生產文號；2019年1月10日，農業農村部畜牧獸醫局發布農牧便201931號關于停止生產豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）的函，要求自2019年2月1日起，豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株

4、）生產企業全部停止生產該疫苗。2007年核發的臨時生產文號同時廢止。豬場選擇使用藍耳疫苗的疑慮：安全性01活疫苗毒與野毒間重組變異的問題；02使用藍耳活疫苗導致臨床副反應的安全疑慮；03滅活疫苗安全概念撬動養殖戶重新使用。藍耳病野毒與疫苗毒重組 活疫苗與野毒都存在重組風險，重組或變異使藍耳病毒株毒力變弱或增強，是藍耳病難于防范的特點；盡管分離到疫苗重組的病毒株，但缺乏重組病毒對豬場造成損失的評估，而定義高致病性疫苗不安全是缺乏科學依據的；單考慮病毒重組的生物安全，停用藍耳病活疫苗，勢必會大大增加豬場感染的風險，造成養殖戶的損失。華藍康疫苗安全分子基礎：基因缺失關鍵技術：病毒傳代致弱過程，使用克

5、隆傳代技術，每隔5到10代克隆純化一次；第18代克隆純化時獲得一株基因缺失病毒株，在Nsp2基因部位缺失360個核苷酸，缺失后19代病毒動物回歸實驗發現毒力減弱。病毒混合物單一病毒華藍康（TJM-F92）基因缺失的意義 基因缺失標記疫苗是國際疫苗發展趨勢；Nsp2基因缺失是病毒毒力減弱部分分子學基礎，已得到國際上相同研究的佐證；更重要的是天津株不易發生毒力返強；Nsp2基因缺失，RT-PCR技術，可用于疫苗與野毒的鑒別診斷，用于種群凈化輔助手段。國際同類研究 國際上使用反向遺傳技術構建了豬繁殖與呼吸綜合征基因缺失疫苗（P129株），在Nsp2基因缺失393個核苷酸，缺失后病毒毒力消失；TJM-

6、F92株Nsp2基因缺失360個核苷酸，缺失的區段大部分重疊。Dal-Young Kim et al：Insertion and deletion in a non-essential region of the nonstructural protein 2(NSP2)of porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)virus:effects on virulence and immunogenicity.Virus Genes(2009)38:118-128.TJM-F92株基因缺失與鑒別診斷1a1b2a2b435675CAPRN

7、A 多聚酶（RNA Polymerase）結構蛋白（Structure Protein）(A)nNsp2 基因經典PRRS病毒RNA 基因結構示意圖高致病性PRRSVNsp2基因90個核苷酸缺失TJM-F92疫苗株Nsp2基因360個核苷酸缺失90個核苷酸缺失360核苷酸缺失克隆篩選傳代多肽 ELISA診斷試劑盒RT-PCR技術設計引物檢測病原檢測抗體RT-PCR鑒別診斷野毒與疫苗毒M 1 2 3 4 5 1000 bp500 bp644bp1004bp1.F3野毒，2.F17野毒與疫苗毒混合，3-5.F92疫苗毒PRRSV TJ株F3、F15、F19和TJM-F92株接種試驗動物的體溫變化曲

8、線 華藍康：TJM-F92株疫苗安全性 各種年齡豬均安全，疫苗接種后未見臨床副反應，包括妊娠期懷孕母豬；病毒血癥持續時間短：約2-4周；水平傳播能力弱，即同居感染能力弱；疫苗毒豬體五代傳代未見毒力返強，基因缺失不易發生返強；無免疫抑制，可與豬瘟、偽狂犬等疫苗同步使用。華藍康（TJM-F92）疫苗使用 國內最大的養豬集團，多年來一直堅持使用TJM-F92株疫苗，豬群穩定，未見安全問題；養殖企業廣泛應用，TJM-F92株逐漸成為主流產品；藍耳不穩定或發病的豬場可使用華藍康進行緊急免疫；TJM-F92株的名字前綴寫了“高致病性”的字樣，加之其它疫苗毒株的毒力較強，誤解TJM-F92株視為不安全。華藍

9、康免疫效力研究（一）華藍康（TJM-F92株）和藍耳滅活疫苗對流行NADC30提供交叉保護？華藍康（TJM-F92株）和滅活疫苗效力比較研究實驗-NADC30-like攻毒試驗設計組別數量疫苗免疫程序攻毒攻擊途徑、劑量0日首免21日二免首免后49日第1組5（TJM-F92株）活疫苗華藍康1頭份/頭/NADC30攻毒106.7TCID50/ml滴鼻2.0ml/頭1.0ml/鼻孔第2組5市售滅活疫苗(CH-1a，L)2.0ml/頭2.0ml/頭第3組5PBS2.0ml/頭/華藍康（TJM-F92株）活疫苗，批號：20200505008，106.0TCID50/頭份，華威特（江蘇）生物制藥有限公司提

10、供；滅活疫苗（Ch-1a株），購自國內L公司。華藍康（TJM-F92）和滅活疫苗效力比較研究實驗-NADC30-like攻毒體溫情況組別ID試驗天數（日）（超過40.2C標紅）01234567891011TJM-F92活苗免疫組32039.539.839.639.939.440.039.839.739.839.539.139.333039.439.939.840.239.839.539.639.239.339.439.539.034639.739.839.539.840.039.139.439.239.639.339.238.938739.339.839.839.839.639.639.839

11、.839.539.239.439.537939.039.839.439.839.54039.939.739.73938.739.3Ch-1a市售滅活苗（L)免疫組38639.740.540.340.339.841.240.639.239.539.439.139.537039.840.639.940.040.040.540.440.139.539.939.039.339839.541.340.841.640.640.540.740.539.740.239.239.739439.540.840.440.339.941.741.040.539.740.339.839.234339.440.339.8

12、40.039.741.040.440.140.340.539.539.4對照組32339.840.240.040.340.441.240.840.440.540.940.340.234039.139.739.539.739.440.039.539.940.040.239.639.338039.140.840.541.541.241.541.341.641.741.140.841.236339.041.140.340.740.741.640.540.141.541.040.539.737839.139.739.839.840.240.139.739.640.240.640.539.7華藍康（TJ

13、M-F92）和滅活疫苗效力比較研究NADC30-like攻毒臨床癥狀組別ID試驗天數（日）1234567891011TJM-F92活苗免疫組320NNNNNNNNNNN330NNNNNNNNNNN346NNNNNNNNNNN387NNNNNNNNNNN379NNNNNNNNNNNCh-1a市售滅活苗（L)免疫組386NNNNABBNNNNN370NNNNNNCNNNN398NNNNNCCNNNN394NNNNABACABCACDNN343NNNBABCABCABCABCCNN對照組323NNNABABABABABABABDABD340NNNBBBNNBNN380NNNABABABABABABA

14、BAB363NNNABABABABABABABA378NNNABABABABBBNN注：A 精神沉郁；B 食欲減退；C 眼結膜炎；D 呼吸困難；H 死亡；N 正常華藍康（TJM-F92）和滅活疫苗效力比較研究NADC30-like攻毒臨床表現 NADC30-like株強毒攻擊后，TJM-F92株活苗免疫豬精神、食欲、行為活動均正常；PRRS滅活苗免疫組，3/5仔豬出現不同程度的精神沉郁、食欲下降、結膜炎等癥狀。試驗期間，TJM-F92株活疫苗免疫豬均未見臨床異常攻毒后第5日起，PRRS滅活苗免疫豬開始出現精神沉郁、食欲減退等癥狀華藍康（TJM-F92）和滅活疫苗效力比較研究NADC30-lik

15、e攻毒統計結果試驗組別使用疫苗體溫升至41三次以上臨床癥狀死亡動物數保護率一組TJM-F92活苗免疫組0/50/50/55/5二組CH-1a株市售滅活苗（L）免疫組5/55/50/50/5三組未免疫對照組5/55/50/50/5華藍康和滅活疫苗對NADC30-like的保護結果 TJM-F92株對于當前流行的NADC30-like野毒株（HN2016株）具有交叉保護，攻毒后沒有體溫和臨床癥狀，沒有肺部病變；CH-1a滅活疫苗對于當前流行的NADC30-like野毒株（HN2016株）無交叉保護，免疫組攻毒后的豬有超過7天的體溫超過40.2，有藍耳病臨床癥狀和肺部病變。TJM-F92株對NADC

16、30交叉保護研究 南京農業大學姜平教授團隊比較TJM-F92株和R98株對流行NADC30-like（FJ1402）的交叉保護研究；結果：TJM-F92株和R98株疫苗均能夠對NADC30-like的攻擊提供良好或部分交叉保護；攻毒后，TJM-F92株免疫的豬沒有臨床體溫，R98株免疫有個別豬的發熱。姜平團隊研究TJM-F92株對NADC30交叉保護結果 數據來源：南京農業大學 姜平研究團隊-2016結論：1.R98株免疫攻毒后出現發熱反應2.TJM-F92株免疫后沒有出現發熱反應3.R98株和TJM-F92株免疫攻毒后14日均檢測不到攻擊毒TJM-F92株對NADC30交叉保護研究 華威特生

17、物研發團隊研究NADC30(HN201605)的交叉保護；結果：華藍康對NADC30-like的攻擊提供良好交叉保護。華藍康免疫效力研究（二）華藍康（TJM-F92株）和藍耳滅活疫苗對高致病性藍耳病強毒（TJ株）保護效果？華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效果對比高致病性強毒TJ株攻毒組別數量疫苗免疫程序攻毒攻擊途徑、劑量0日首免21日二免首免49日攻毒第1組5HP-PRRSV TJM-F92株活疫苗1頭份/頭/攻擊HP-PRRSV TJ F3104.5TCID50/ml滴鼻2.0ml/頭1.0ml/鼻孔第2組5CH-1a株市售滅活疫苗（L）2.0ml/頭2.0ml/頭第3組5PBS2.0m

18、l/頭/華藍康（TJM-F92株）活疫苗，批號：20200505008，106.0TCID50/頭份，華威特（江蘇）生物制藥有限公司提供 滅活疫苗（Ch-1a株），購自國內L公司華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力評價對比試驗TJ株攻毒后體溫監測組別ID試驗天數（日）（超過40.2C標紅）01234567891011TJM-F92活苗免疫組40039.038.739.339.739.438.939.539.638.738.639.338.530239.339.238.538.939.238.739.138.838.739.438.539.637339.439.139.238.739.538

19、.538.738.939.238.638.539.437739.239.438.639.238.938.539.138.739.439.339.739.539939.439.339.539.439.639.439.739.539.639.339.739.8CH-1a株市售滅活苗免疫組32739.639.839.740.740.741.541.341.540.040.9/35639.240.740.341.240.941.341.441.240.841.039.739.935739.339.340.641.340.941.741.2/35939.540.340.940.641.341.240.7

20、39.739.039.039.039.036939.041.139.840.541.240.941.438.738.4/對照組43039.439.141.140.639.841.441.341.241.340.941.140.743539.239.540.241.340.241.341.941.341.840.340.539.943639.139.239.740.540.741.741.941.641.440.840.139.740239.439.340.141.340.641.542.142.541.941.0/43739.239.539.740.941.741.341.541.641.64

21、0.740.340.0ADE效應 組別ID試驗天數（日）1234567891011TJM-F92活苗免疫組400NNNNNNNNNNN302NNNNNNNNNNN373NNNNNNNNNNN377NNNNNNNNNNN399NNNNNNNNNNNCH-1a株市售滅活苗（L）免疫組327NABABABABCABCABCABCABCH/356NABABABABCABCABCABNNN357NABABABABCABCH/359NABABABABCABCABCABABABN369NABABABABCABCABCABCH/對照組430NNNBABABABDABDABDABDABD435NNNBABABA

22、BDABDABCDABDABD436NNNBABABABDABDABDABCDABCD402NNNABABABABDABDABH/437NNNABABABABDABDABCDABDABD華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力評價對比試驗TJ株攻毒后臨床癥狀注：A 精神沉郁；B 食欲減退；C 眼結膜炎；D 呼吸困難；H 死亡；N 正常華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力評價對比試驗TJ株攻毒后臨床表現l HP-PRRSV TJ株強毒攻擊后，PRRS滅活苗免疫豬均出現不同程度的精神沉郁、食欲下降、結膜炎等PRRS典型癥狀，至攻毒后第10日死亡3頭，仔豬均未獲得保護，且臨床癥狀出現時間較對照組

23、提前23日；l TJM-F92株活苗免疫豬精神、食欲、行為活動均正常。試驗期內，TJM-F92株活疫苗免疫豬均未見臨床異常攻毒后第5日滅活苗免疫豬出現PRRS典型臨床癥狀華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力評價對比試驗TJ株攻毒后剖檢圖l PRRS滅活苗免疫組，3/5豬出現明顯的肺臟病變,2/5小面積病變；l TJM-F92株活苗免疫豬肺臟4/5正常,1/5（377號出現小片病變）。CH-1a株市售滅活苗（L）免疫組TJM-F92株活苗免疫組華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力對比試驗TJ株攻毒統計試驗組別使用疫苗體溫升至41三次以上肺臟剖檢片狀實變臨床癥狀死亡動物數保護率一組TJM-

24、F92活苗免疫組0/51/50/50/580%二組CH-1a株市售滅活苗（L）免疫組5/54/55/53/50三組未免疫對照組5/55/55/51/50華藍康（TJM-F92株）與滅活疫苗效力總結TJM-F92株活疫苗免疫后對高致病性藍耳病強毒株攻毒完全保護；Ch-1a株滅活苗免疫后對高致病性藍耳病強毒株攻毒無保護；Ch-1a株滅活疫苗免疫后攻毒表現出典型ADE抗體依賴性增強作用（ADE效應）病毒特異性抗體能使病毒更易于侵入機體的靶細胞，從而導致感染力增強。滅活疫苗免疫產生的抗體不但不能提供保護作用，反而協助病毒進入靶細胞，有助于病毒的復制，提高感染率，使病毒的數量大大增加。非中和抗體FcR方

25、便病毒進入靶細胞感染華南農大黃毓茂教授團隊三種藍耳活疫苗的安全性和有效性進行比較分組數量使用疫苗攻擊用強毒攻毒途徑攻毒劑量T17無疫苗對照（DMEM）不攻擊病毒對照（DMEM）滴鼻+肌肉注射各1ml104.0TCID50/mlT27無疫苗None溫氏分離強毒株TP株Genbank登錄號：EU864233.1T37IngelvacT47TJM-F92T57JXA1-R三種藍耳活疫苗的安全性比較結果T5：JXA1-R組T4：TJM-F92組圖為：免疫后28日內平均日增重結論：江西株出現體溫升高和日增重下降，TJM-F92株未見體溫升高和日增重降低。圖為：免疫后7日內體溫變化三種藍耳活疫苗的保護效率

26、結果T2 空白對照組T3 IngelvacMLV組結論：TJM-F92株和江西株對流行毒株保護效率高，而IngelvacMLV組攻毒后有臨床癥狀和體溫升高。圖為：攻毒后的體溫變化圖為：攻毒后臨床評分T4 TJM-F92組華藍康與其它TJM-F92株疫苗的區別懸浮培養：生產關鍵工藝改進，提高病毒效價；更有效：疫苗批次間穩定，抗原高于106.0TCID50/頭份，超過國標；更安全：無污染、無抗生素、低血清培養，外源病原檢測內控標準更嚴格；優化耐熱凍干保護技術：更加便于儲存運輸，有效期24個月；嚴格控制生產的種毒批次，保障免疫效力；持有全球專利和疫苗所有權，獨家生產銷售。華藍康：緊急免疫臨床應用05

27、10152025302017/1/12017/1/82017/1/152017/1/222017/1/292017/2/52017/2/122017/2/192017/2/262017/3/52017/3/122017/3/192017/3/262017/4/22017/4/92017/4/162017/4/23Abortion numberSows abortion of CF-I2/28-3/1 所有母豬緊急免疫華藍康（TJM-F92）4/1 所有母豬正常免疫豬瘟緊急免疫結果：全群母豬緊急免疫華藍康后，流產比例明顯降低。案例：5000頭母豬場關于藍耳病凈化 農業農村部關于推進動物疫病凈化工

28、作的意見（農牧發202129號）力爭通過5年時間，80%的國家畜禽核心育種場（站、基地）通過省級或國家級動物疫病凈化場評估，構建豬繁殖與呼吸綜合征等重大動物疫病凈化場；凈化基本程序：減少活疫苗-停用活疫苗-亞單位或滅活疫苗-監測-淘汰-更新-陰性豬群的生物安全措施-保持陰性狀態；技術保障：目前沒有有效滅活或亞單位疫苗，淘汰陽性豬需要大量財力支撐，國際上沒有成熟的藍耳病凈化技術可借鑒；藍耳病凈化 生物安全保障；標記疫苗+配套的RT-PCR試劑盒，達到疫苗毒與野毒的區分；誤區：滅活疫苗凈化 化學藥物凈化 激素控制的凈化凈化的權衡 豬群面臨感染的風險與凈化的維護成本；凈化與疫苗免疫的評估：臨床狀況：

29、健康無流產發，抗原陰性；生產指標：繁殖指標、斷奶健仔數、保育和育肥的健康度、日增重；一旦有疫情預警時，可使用華藍康緊急免疫；結論疫苗免疫不是控制藍耳病的唯一方式，但一定是最簡單、最直接、最經濟和最有效的方式。使用華藍康（高致病性繁殖與呼吸綜合征活疫苗，TJM-F92株，懸浮培養）是防控藍耳病的最好選擇!個人簡介 研究員/教授,博士生導師 國家特聘專家 國務院特殊津貼A類獲得者 第一屆全國動物防疫專家委員會委員 第五、六屆中國獸藥典委員會委員 江蘇省創新團隊領軍人才 江蘇省雙創人才 泰州113領軍人才 新泰州建設功臣v 主持完成了農業部公益性行業（農業）科研專項（項目首席專家）、科技部支撐計劃、國家863計劃、“十三五”重點研發計劃、江蘇省成果轉化等科研項目。v 1978-1990：攻讀學士、碩士、博士v 1990-1995年任職于中國獸醫藥品監察所v 1995-2004年先后任職美國堪薩斯州立大學，美國先靈葆雅、輝瑞動保資深科學家v 2004年回國先后擔任乾元浩生物、內蒙古必威安泰、吉林國原動保公司總經理v 2011年創建華威特（江蘇）生物制藥有限公司2004年回國后的榮譽國內外工作經歷主持多項國家級省科研項目感謝聆聽！