豬流行性腹瀉流行現狀與防控對策錢平 華中農業大學.pdf

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1、錢 平華中農業大學 教授/博導廣西揚翔股份有限公司 獸醫總監HP-PRRSV2006當前我國豬病流行情況ASF在中國流行態勢 即全國各地，一年四季，點狀或局部片狀。即全國各地，一年四季，點狀或局部片狀。即冬季、春節后、雨季集中爆發季節性高峰即冬季、春節后、雨季集中爆發季節性高峰當前國內流行特點u流行毒株多樣化u臨床癥狀不明顯u非瘟病毒污染廣強毒株：基因II型（主流病毒）變異毒：自然弱毒（基因I型弱毒或II型自然變弱的毒株？）SG缺失毒（CD2v/MGF）DG缺失毒（MGF+CD2v）YN毒株？混合感染基因I和II混合？一、當前PEDV流行的現狀二、非瘟常態下PED防控新策略匯報內容一、豬流行性

2、腹瀉病毒的流行現狀u 19711971年，英國：年，英國：PEDPED首首次發生次發生u 19771977年，比利時：首年，比利時：首次分離到病毒，命名次分離到病毒，命名為為PEDV CV777PEDV CV777u 2000-20142000-2014年間，歐洲年間，歐洲很少發生很少發生PEDVPEDVu 20102010年新一輪年新一輪PEDPED在亞在亞洲和美洲爆發流行洲和美洲爆發流行PED在中國大流行（2010年-2022年）1984年首次證實PEDV存在，2010年前主要呈地方性流行；2010年底以來，豬流行性腹瀉(PED)在中國大規模爆發，并呈現以下特征：高發病率、高死亡率免疫過P

3、EDV疫苗的豬場也未能幸免除了哺乳仔豬，斷奶仔豬、育肥豬、母豬均有發病臨床表現：高發病率、高死亡率當前流行的豬流行性腹瀉的臨床癥狀新生仔豬嘔吐、拉乳色、黃色糞便、水樣腹瀉、脫水、死亡當前流行的仔豬病毒性腹瀉的臨床癥狀PEDV與其它腹瀉相關病毒混合感染嚴重p PEDV與輪狀病毒的混合感染比例最高p PEDV與PDCoV的共感染情況在增加p 臨床上先發生輪狀、從而誘發PED的案例比較多PED已呈常態化發病一年四季都有腹瀉疫病發生，冬春季節發病率高，但5-9月份也呈常態化發病從腹瀉病料中檢出率最高的是PEDV(82.1%)，RV檢出率為1.9%；TGEV檢出率為1.1%傳染性因素引起腹瀉非傳染性因素

4、腹瀉營養性腹瀉：飼料因素應激因素：斷奶環境因素：衛生條件差、寒冷、潮濕其他原因病毒：TGEV、PEDV、RV、PDCoV、PPV、PrV、SF等細菌：Ecoli、沙門氏菌寄生蟲：球蟲其他病原微生物：蛇型螺旋體引起腹瀉發生的病因及其復雜性二、非瘟常態下冬季豬流行性腹瀉如何防控？服務中心洗消中心檢測中心物資總倉中央廚房隔離中心數據管理管道運輸A)結構化生物安全：外部服務輔助防控+豬場“鐵桶”防控1、外防輸入-外部生物安全管控u病豬和帶毒豬是主要的傳染源u糞口途徑由消化道傳播u運豬車或是PEDV傳播罪魁禍首。uPEDV主要靠接觸方式在場間和豬舍間傳播。u鳥和鼠：傳播途徑之一。u黏膜免疫是其主要免疫途

5、徑。（1）后備豬培育與馴化活疫苗+滅活疫苗腸道（PEDV）+滅活疫苗活病毒+滅活疫苗70日齡日齡100日齡日齡140-150日齡日齡（2）車輛管控溫度（溫度（）耐受時間耐受時間感染豬數感染豬數71.110min0%(0/4)62.710min25%(1/4)54.410min25%(1/4)37.712 hours50%(2/4)2024 hours25%(1/4)207 days0%(0/4)糞便中PEDV在金屬表面（拖車）中存活情況清除有清除有機物機物消毒消毒烘干烘干切斷病切斷病原傳播原傳播配套設施：區域車輛洗消中心（洗消烘）、養殖場洗消點和烘房！泡沫清洗消毒藥消毒烘干消毒（60，1h）檢

6、測（3）四害管控-鳥地面：翻躍圍墻；空中：直飛進入；地下：穿越下水管道。下水管道地面地下圍墻井蓋生產區生產區生產區生產區生活區空中防控策略：實體圍墻、擋鼠板、防鼠網、驅鳥器、紗窗、門簾?。?）飼料管控-PEDV傳染新途徑湖北某豬場的飼料廠PEDV檢測結果熱粉料工藝：85度5-10分鐘揚翔加熱工藝流程示意圖喂料器制粒機3級調質保持格林冷卻烘干一體機緩沖斗 PEDV對溫度敏感；80 5分鐘失活；70 10分鐘失活；60 30分鐘不穩定；50 中等穩定2、內防擴散-內部生物安全管控低級別的生物安全LB：沒有任何防護（No protection）中等級別的生物安全MB：換鞋，洗手，換衣服（Danish

7、 Entrance）高級別的生物安全HB：洗澡（Shower）產房區消產房區消毒 通 道毒 通 道懷孕區消懷孕區消毒 通 道毒 通 道區域劃分、豬、人、物品和糞等的流向（1）內部生物安全PEDV在糞污中的存活時間可達9個月?。?）污道管控：糞道的污染-PEDV傳染新途徑（3）產房空欄清洗消毒監控u理想的全進全出：u完全清空豬舍u集中、正確的清洗u徹底消毒u完全干燥并有足夠時間空欄u檢查豬舍和使用新記錄單產房空欄清洗消毒監控溫度（溫度（）耐受時間耐受時間感染豬數感染豬數71.110min0%(0/4)62.710min25%(1/4)54.410min25%(1/4)37.712 hours50

8、%(2/4)2024 hours25%(1/4)207 days0%(0/4)糞便中PEDV在金屬表面（拖車）中存活情況G5G55252G8G84 4G26G261111G4G43535G9G98484G3G39 9G6G62 2G1G14 4G2G22 2G12G121 1其他其他9 9G4G5G9輪狀病毒對理化因素抵抗力較強：室溫可存活7個月；耐超聲和脂溶劑；60 30分鐘可滅活！20212021年臨床樣品年臨床樣品PoRVPoRV測序分析情況測序分析情況(204(204份測序樣品）份測序樣品）B)強化免疫：提升豬群特異性免疫力群體免群體免疫力疫力環境中環境中病毒量病毒量消滅傳染源保護易感

9、動物切斷傳播途徑u毒株匹配；疫苗質量u免疫效果；初乳管理l G2群（變異毒株）流行毒株,78.5%(654/833)l G1群（經典毒株）所占比例6.0%(50/833)l S-INDEL毒株(G1群和G2群的重組毒株）所占比例15.5%(129/833)1977-2022年全球年全球PEDV毒株分析毒株分析From GenBank:1977-2022年年3月月u 毒株匹配當前主要流行毒株當前主要流行毒株PEDV流行毒株的變異特征流行毒株在G2群經典毒株在G1群可能是現有疫苗難以提供免疫保護的主要原因Lin et al.,201620212021年臨床樣品年臨床樣品PEDVPEDV測序分析情況

10、測序分析情況(133(133份測序樣品）份測序樣品）PEDVPEDV仍在持續變異，優勢毒株發生變化仍在持續變異，優勢毒株發生變化PEDVPEDV重組頻率重組頻率流行性腹瀉病毒GIIa型和GIIb型之間交叉保護力差p 免疫免疫GIIbGIIb亞型豬流行性腹瀉疫苗的豬群針對亞型豬流行性腹瀉疫苗的豬群針對GIIaGIIa亞型的流行性腹瀉毒株中和抗體水平較低亞型的流行性腹瀉毒株中和抗體水平較低。p 免疫GIIb亞型豬流行性腹瀉疫苗(CH/HNPJ/2017)的豬群不能抵抗GIIa亞型的流行性腹瀉毒株(CH/HBXT/2018)的攻擊，攻毒后5d，75%(3/4)的豬只能夠檢測到排毒，臨床表現為水樣腹瀉

11、。(X.Liu,et al.2019)p HBXT/2018 GIIap HNPJ/2017 GIIb冠狀病毒疫苗滅活和純化工藝與疫苗質量密切相關u 疫苗質量Viral Entry and Conformation ChangesPre-fusionPost-fusion基于結構的PEDV疫苗設計PEDV蛋白分子表達情況蛋白編號產量(mg/L)蛋白編號 產量(mg/L)蛋白編號 產量(mg/L)野生型S蛋白0.365Ag024 26.8Ag049 23.129Ag002 lowAg025 2.36Ag050 22.858Ag003 lowAg026 lowAg051 13.61Ag004 lo

12、wAg033 52.8Ag052 48.42Ag005 lowAg034 157Ag053lowAg006 lowAg035 206Ag054lowAg007 lowAg036 4.95Ag055lowAg008 lowAg037 4.81Ag056lowAg009 lowAg038 1.52Ag060 lowAg010 lowAg039 40.5Ag061 143.1Ag014 lowAg040 lowAg062 lowAg015 lowAg041 18.445Ag063 lowAg016 1.04Ag042 0.517Ag064 lowAg017 1.57Ag043 2.149Ag065

13、lowAg018 1.1Ag044 33.884Ag066 lowAg019 lowAg045 14.7Ag067 lowAg020 1.38Ag046 39Ag068 lowAg021 lowAg047 21.6Ag069 109.08Ag022 0.724Ag048 68.426Ag070 74.24Ag023 12.6PEDV pre-Fusion SPEDV pre-Fusion SPEDV重組蛋白疫苗抗原篩選通過結構生物學的改良設計，疫苗的產量較野生型提高了近通過結構生物學的改良設計，疫苗的產量較野生型提高了近600倍倍(1g/L)；在電鏡下在電鏡下S蛋白的結構有近蛋白的結構有近90

14、%保持在融合前體狀態，具有良好的疫苗應用前景保持在融合前體狀態，具有良好的疫苗應用前景。Pre-FusionPost-Fusion基于結構的PEDV疫苗誘導高水平的中和抗體（PEDV 2a毒株），明顯優于商品化滅活疫苗！u 免疫效果uPEDV保護需要粘膜免疫反應；u粘膜免疫需要口服給藥，并基于在腸腔的IgA抗體，母豬口服誘導持久的腸道免疫力；u乳汁中產生的免疫力可以傳遞給哺乳仔豬以保護其免受疾??；u冠狀病毒疫苗免疫原性不是很好，變異株疫苗是目前市場上較為有效的疫苗；PEDV經胎盤垂直傳播經胎盤垂直傳播可以從感染PEDV的分娩母豬的臍帶、初生仔豬的睪丸中檢測并分離到病毒0115DeliveryL

15、actation50100VaccineVaccinePigltet diarrhea Sow diarrhea Goal:Increase neutralizing antibodiesagainst PEDV to protect directly sows(activeimmunity)and piglets(passive immunity).u活疫苗+滅活疫苗+滅活疫苗u滅活疫苗+滅活疫苗80Vaccine腹瀉口服+免疫對照組對照組實驗組實驗組序號棟號死亡頭數拉稀死亡頭數拉稀比例成活率備注序號棟號死亡頭數拉稀死亡頭數拉稀比例口服疫苗日期成活率 備注1產房2棟4090%98.08%沒有

16、口服疫苗1產房18棟300%1月14日98.50%2產房13棟5085%97.74%2產房19棟200%1月14日98.70%3產房3棟4085%98.39%3產房20棟400%1月14日99.00%4產房14棟1075%99.57%4產房26棟200%1月14日99.10%5產房4棟4080%98.30%5產房25棟300%1月14日98.50%6產房15棟700%97.21%6產房21棟400%1月14日98.40%7產房5棟3065%98.77%小結1、對照組沒有口服疫苗，仔豬在14日齡開始拉稀，而實驗組口服了疫苗，14日齡后沒有出現拉??；2、對照組仔豬拉稀比例占71%,仔豬沒有因拉稀導

17、致死亡，實驗組拉稀比例0%，目前已將近斷奶沒有出現拉??；3、對照組仔豬拉稀時，母豬也拉稀，共11頭，實驗組沒有出現母豬拉??；4、實驗組1-14日（產前14天）開始口服疫苗，對照組沒有口服疫苗；5、總結：口服腹瀉弱毒疫苗效果明顯，效果好！8產房16棟8560%96.76%9產房6棟6080%97.64%10產房17棟6090%96.92%活疫苗+滅活疫苗免疫乳汁編號乳汁編號ODOD值值/IgA血清編號血清編號ODOD值值/IgG1 10.945 0.945 1 11.101 1.101 2 21.445 1.445 2 20.637 0.637 3 30.739 0.739 3 30.503 0

18、.503 4 40.834 0.834 4 40.812 0.812 5 51.360 1.360 5 50.770 0.770 6 60.392 0.392 7 70.545 0.545 PED-IgA 陽性：陽性：OD值值0.421；陰性：；陰性：OD值值0.421。陽性表示抗體合格。陽性表示抗體合格PED-IgG 陽性：陽性：OD值值0.470；陰性：；陰性：OD值值0.470。陽性表示抗體合格。陽性表示抗體合格Passive immunization(Theil,2014)Delivery01224Colostrum3672Transient MilkMature Milku 初乳管理

19、u 減毒活疫苗可能有用，但是通過細胞傳代喪失了產生保護性免疫的能力；u 滅活疫苗保護性免疫差。在活病毒感染或弱毒疫苗接種后，利用最新毒株制備的疫苗重復接種或基因工程疫苗可以增強其免疫保護效果；u 免疫目標：在產前母豬產生分泌型IgA，通過初乳傳遞給仔豬。IgG免疫？u 通過感染的細胞培養的低毒力PEDV有計劃的返飼可以獲得長期持久的保護性免疫?？梢酝ㄟ^仔豬傳代獲得純的腸道培養物（接種后8-15小時收集腸道）。如何提升免疫效果？u后備豬馴化u活疫苗（或者活毒）+滅活疫苗u1胎母豬u活疫苗（可選）+滅活疫苗+滅活疫苗u2胎以上u滅活疫苗+滅活疫苗從糞便中檢測到病毒早于腹瀉的臨床癥狀一旦發現感染豬，尤其是待產母豬，及時隔離，甚至推遲進產房可采用PEDV、TGEV、PDCoV的多重RT-PCR檢測可采用鑒別經典毒株和流行毒株的RT-PCR三種腹瀉病毒檢測經典PEDV與變異PEDV的鑒別RT-PCRPEDV膠體金試紙條檢測C)強化病原監測懷孕母豬PEDV的監測流程豬場腹瀉的綜合防控生物安全（外部生物安全和內部生物）免疫監測（最好的措施是后備豬馴化（活毒或病料馴化）+滅活疫苗免疫，抗體可以維持9周）生產管理（溫度、濕度、干燥度；生產節律，不能后備、1胎和經產母豬混養；周生產、批次生產）冬季腹瀉“一場一策”方案：預防、疫情處置、獎罰歡迎批評指正！謝謝！