豬偽狂犬病的綜合防治與凈化 吳斌華中農業大學.pdf

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1、第11屆李曼養豬大會交流報告十三五國家重點研發計劃項目：2018YFD05008；湖北省重點研發計劃:2021BBA085豬偽狂犬病的綜合防控與凈化報告人：吳 斌華中農業大學動物醫學院動物傳染病教研室2022年11月目錄豬偽狂犬病的特點01豬偽狂犬病的凈化04豬偽狂犬病的綜合防控03豬偽狂犬病流行現狀02PART 01豬偽狂犬病的特點偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)PRV為皰疹病毒科皰疹病毒屬，能夠感染多種動物，主要導致豬偽狂犬病，以腦脊髓炎、呼吸道疾病和種豬繁殖障礙為特征，可感染各個日齡的豬群，廣泛分布于全球；1990s 后，我國通過免疫控制了PRV流行，但201

2、1年底再次爆發疫情，給養豬業帶來重大經濟損失，我國曾將其列為二類動物疫病，已明確列入種豬需凈化疾病。Mettenleiter T C.Pseudorabies Virus.Encyclopedia of Virology,2008.Guosong Wang et al.NatureCommunications,2022.偽狂犬病世界范圍內的流行現狀，WOAH,2022/10豬偽狂犬病的特點PRV的免疫學特點：體液免疫、細胞免疫、局部免疫；免疫保護期PRV的流行病學特點：多種動物可感染或帶毒；多種傳播途徑傳播；豬可建立潛伏感染，終生帶毒并間斷性排毒；豬感染后的臨床特點：仔豬；保育豬；生長育肥豬；

3、種豬（公豬、妊娠母豬、哺乳母豬、后備種豬）PRV病毒的致病性與重要毒力相關基因基因名稱主要功能備注TK基因在神經細胞中的增殖并產生感染性粒子主要毒力相關基因gG基因趨化因子抑制作用趨化因子結合蛋白gE基因病毒在神經中傳遞有關病毒增殖非必需基因RR基因急性感染和潛伏感染中起關鍵作用gB基因免疫原性基因抗體檢測靶標蛋白gC基因免疫原性基因病毒入侵所必須gD基因病毒入侵；保守性強PCR診斷的靶蛋白豬偽狂犬病的特點偽狂犬病在中國的兩次大流行：通過遺傳進化分析，變異毒株處于獨立的基因型進化分支。研究表明變異毒株的 gC、gE等多抗原位點發生變異，免疫原性增強，毒力增強。通過對毒株的表型和毒力測定表明，與

4、早期基因型毒株相比，近年來PRV毒株毒力不斷增強，對豬群的致病性不斷增加。偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Wong G et al.EMI,2019 PRV再次大規模爆發后不斷發生變異，出現新的基因型；陸續有研究表明發現變異毒株與疫苗毒株發生同源重組現象；2017-2022年期間，中國已報道26例PRV感染人的臨床病例，表現出嚴重的神經系統損傷及后遺癥，嚴重危害公共衛生安全。Viruses,2021PART 02豬偽狂犬病流行情況2011-2021年豬場PRV-gB/gE抗體陽性檢出率gB抗體陽性檢出率gE抗體陽性檢出率Unpublished data2012-20

5、21年豬場PRV野毒抗原及抗體陽性檢出率Unpublished data流行毒株出現毒力增強現象，導致中大豬出現嚴重呼吸道癥狀，甚至死亡豬偽狂犬病的流行情況Unpublished data病例復制結果顯示新毒株對12周齡肥豬致病率100%豬偽狂犬病的流行情況剖檢觀察到典型PRV病變：腦組織出血、肝臟白色梗死灶、肺臟出血水腫、扁桃體化膿壞死Unpublished data病例復制結果顯示新毒株與其他毒株相比對肥豬致病性更強豬偽狂犬病的流行情況強毒組肥豬體溫升高值、口鼻肛門排毒、病毒血癥、ELISA抗體及組織病毒載量等情況均高于其他組Unpublished data豬場PRV分離情況豬場病料類型2

6、019-2022年臨床送檢典型陽性樣品在PK-15細胞上的平均病毒分離率為85%，毒價在10-5.94 10-7.49之間。毒株分離率高的樣品主要是有呼吸道癥狀的仔豬肺臟和淋巴結樣品。gC基因遺傳進化分析表明分離株全部屬于基因型毒株。Unpublished data病毒分子流行病學山東3福建1江西3安徽1湖北12廣西1上海1內蒙古1甘肅1江蘇3北京1浙江4湖南2河南8廣東345株PRV變異毒株來源于15個省份，以湖北、河南為主。45株偽狂犬病病毒臨床毒株（20122017年分離株）的全基因組重測序Viruses,2021病毒分子流行病學45株偽狂犬病病毒臨床毒株的全基因組重測序 45株PRV基

7、因組中存在較多的變異區域Viruses,2021病毒分子流行病學45株偽狂犬病病毒臨床毒株的全基因組重測序 PRV遺傳進化分析顯示主要分為2個主要的基因型：所有的中國分離株位于基因型，而國外分離株全部位于基因型。Viruses,2021病毒分子流行病學45株偽狂犬病病毒臨床毒株的全基因組重測序 PRV間存在較強的同源重組現象Viruses,2021病毒分子流行病學 2019年首次從患者腦脊液中分離得到一株PRV hSD-1/2019，為PRV向人群的跨種傳播提供了直接有力的病毒分離證據。生物學特性及基因組分析發現，hSD-1/2019毒株與我國豬群中當前流行的PRV變異毒株高度相似。分離得到人

8、源PRV毒株 hSD-1/2019病例1的病毒載量及抗體變化基于基因組和gC基因的系統進化樹分析Liu Q et al.Clinical infectious diseases,2020病毒分子流行病學2020年在屠宰場分離到1株病毒：疫苗毒與野毒的重組毒 gC基因遺傳進化分析顯示重組毒處于獨立的2.2分支，全基因組中有多處疫苗毒和野毒重組事件Unpublished data病毒分子流行病學 重組毒的高免血清對其他類型的毒株都有較強的中和能力2020年在屠宰場分離到1株病毒：疫苗毒與野毒的重組毒Unpublished data病毒分子流行病學PRV毒株信息數據庫（120余株）。http:/:8

9、080/PRV/PART 03豬偽狂犬病的檢測與防控豬偽狂犬病的實驗室診斷病原學診斷豬偽狂犬病的實驗室診斷免疫學診斷豬偽狂犬病的防控當前臨床防控豬偽狂犬病面臨的問題免疫程序的制定與優化生物安全體系與飼養管理當前中國豬偽狂犬病的控制思路當前臨床防控豬偽狂犬病面臨的問題PR在國內仍有一定流行率，野毒感染豬群廣泛存在；商品豬群未免疫或免疫不足，導致病毒在中大豬群中大量增殖，使種豬、仔豬等易感豬感染；由于ASFV防控需要，部分豬場豬群偽狂犬病免疫減少，產生免疫空白；傳播途徑多：接觸傳播、胎盤傳播，精液傳播，野生動物或媒介傳播。篩選合適的疫苗，制定合理的免疫程序建議免疫程序（依感染風險評估調整）種豬：“

10、3+2免疫程序”，即一年普免3次活疫苗，每胎產前免疫滅活疫苗（首次滅活疫苗應免疫2次，間隔4周）；后備：配種前8周齡一次免活疫苗；配種前4周滅活苗加強免疫；產前4周滅活疫苗免疫，以后按生產母豬免疫程序。仔豬：“2+1+1免疫程序”0日齡和45日齡活疫苗；90-95日齡滅活苗；（生產周期6-7月以上豬群在140日齡加強免疫一針活苗），種用豬120130日齡免疫活苗。生物安全體系與飼養管理育種+生物安全+飼養管理健康/疾病防重于治：1）規范豬場的生物安全措施人流、物流、無害化處理、自繁自養、多點式飼養、全進全出2）建立、完善防疫和生產管理制度制定適于基層人員使用的操作程序（SOP）3）嚴格衛生消毒

11、制度4）做好PRRSV、PCV等免疫抑制性疾病的防控5）科學規范用藥：種豬禁用皮質固醇類藥物6）減少各種應激因素當前中國豬偽狂犬病的防控思路用安全性高的基因缺失疫苗（推薦HB-98或HB-2000株）進行基礎免疫結合滅活疫苗，進行強化免疫，阻止感染和后備豬陽轉凈化種豬群，每年公豬和后備豬應為全陰性（豬只感染病毒將終生攜帶，成為該病傳染源）維持種群凈化，實現免疫無疫，探索非免疫無疫監測評估阻止發病阻止感染阻止排毒阻止陽轉PART 04豬偽狂犬病的凈化通過監測、檢驗檢疫、隔離、撲殺等一系列綜合措施，在特定區域或場所消滅和清除病原，從而達到并且維持在該范圍內動物個體不發病和無感染的狀態。豬偽狂犬病的

12、凈化動物疫病凈化是實現疫病消滅的必經之路流 行控 制凈 化消 滅降低某種動物疫病的流行率消除特定區域內感染和病原整個國家消滅病原實現無疫動物群體中有某種疫病流行控制 凈化“十三五”豬場疫病凈化項目(2018YFD0500800)介紹精準凈化技術研究疫病流行和病毒變異規律完善病原和抗體檢測技術，實時評價疫苗效果探索非免疫無疫區域凈化或協同凈化技術探索區域凈化和多病種協同凈化模式形成普遍性的、可復制的凈化方案，推廣示范凈化區建設區域生物安全體系建設規范疫病凈化評估標準，維持區域凈化效果適用于不同養殖模式逐步擴大凈化范圍維持區域凈化項目總目標：開展豬瘟、豬偽狂犬病區域凈化、種豬場高致病性藍耳病凈化集

13、成示范擬解決的關鍵科學問題：精準凈化技術、區域凈化技術、凈化示范區建設項目任務分解35課題2：豬偽狂犬病凈化技術研究與示范36豬偽狂犬病的凈化豬偽狂犬病的凈化過程 根據豬場規模、豬群結構和分布特點，設計合理的采樣方案，對豬場進行摸底調查，掌握場內偽狂犬病疫情狀況；評估豬群免疫保護水平（有條件采用中和抗體水平評價或細胞免疫水平評價），確定豬群的PRV gE轉陽時間點與gB消長規律；評估豬場現有的免疫方案，針對不同的豬群進行優化改進，確保較高的免疫保護率。準備階段控制階段強制凈化階段豬偽狂犬病的凈化過程 免疫-監測疫苗：含gE缺失的活疫苗和滅活疫苗；合理免疫程序；監測：每半年進行一次血清學和病原學

14、檢查，抽樣比例58%；陰陽性豬分群飼養當gE陽性豬比例下降到20%以下時開始分群，將血清學gE陽性豬與陰性豬分開飼養；逐步淘汰和縮小陽性豬群 強化陰性群的隔離與監測，建立完全健康的gE陰性豬群，確保后備豬群陰性 其它疫病的感染控制準備階段控制階段強制凈化階段豬偽狂犬病的凈化過程 對全群豬只進行檢測，剔除全部陽性豬只；剔除后建立的健康豬群于一個月后按10比例抽樣復查，無陽性豬則三個月后按相同方法進行復查，連續兩次為陰性者則每半年進行一次血清學和病原學抽樣復查，抽樣復查如有陽性，在陽性率1%以內，按剔除后建立的健康豬群方式進行免疫和監測，1%5%則重新進行全群檢測剔除全部陽性豬只；關鍵點：公豬、后

15、備種豬 哨兵豬設置準備階段控制階段強制凈化階段豬偽狂犬病凈化的非技術性關鍵因素生物安全建設豬偽狂犬病凈化的非技術性關鍵因素生物安全建設病毒在豬場內傳播病毒在豬舍內傳播病毒在豬欄內傳播項目取得的成果開展流行病學調查，闡明我國三種疫病的病原變異與分布情況針對我國生豬養殖業中豬瘟、豬偽狂犬病及豬繁殖與呼吸綜合征病原變異與分布掌握不全面等問題，開展了大規模、系統性、持續性的流行病學調查，為掌握三種疫病的流行動態、高效診斷和防控產品的研發及三種疫病的精準凈化提供了重要支撐。發現我國流行的CSFV為基因2.1亞型 發現我國流行的PRV為基因II型 發現我國流行的PRRSV主要為HP-PRRSV和NADC3

16、0-like毒株Viruses,2021Arch Virol,2020PeerJ,2018山西農業科學，2021中國獸醫學報，2021畜牧獸醫學報，2020微生物學報，2020不同PRV遺傳變異分析PRSRV遺傳進化分析CSFV遺傳進化分析項目取得的成果建立了4種豬偽狂犬病診斷和檢測技術，申報新獸藥證書2項 建立了豬偽狂犬病變異毒株gB和gE蛋白的阻斷ELISA抗體檢測方法，與國外同類產品的符合率分別為96.30%和94.7%；均已提交新獸藥注冊申請；建立了豬偽狂犬病毒的PMA-qPCR檢測方法，該方法能有效區分活死病毒，可對1.5104copies/L以內的病毒有效擴增，具有靈敏度強和特異性

17、高的特點；研制了豬偽狂犬病疫苗毒和野毒熒光定量PCR鑒別檢測方法，適用于豬偽狂犬病病毒野毒與gI、gE基因缺失疫苗的鑒別診斷和PRV的流行病學調查。項目取得的成果研發1種豬偽狂犬病疫苗，開展2種候選疫苗技術儲備，獲得新獸藥證書1項 研發了豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗（HNX-12株），獲批新獸藥證書；構建了PRV四基因缺失疫苗株（JXFC gE/gI/TK/gG），小鼠試驗顯示其安全性和免疫原性良好；研制了PRV囊膜糖蛋白gD 基因mRNA疫苗，研究表明該疫苗能夠抵御病毒攻擊，可以誘導良好的體液免疫與細胞免疫應答。項目取得的成果制定和完善三種疫病凈化方案，標準6項、其他規范性文件17項，獲批

18、地方標準4項，企業標準2項。項目取得的成果在全國14個省份的72家示范基地開展了三種疫病的凈化 通過開展本底調查、集成凈化方案并進行應用示范、定期對凈化效果及凈化維持效果進行監測評估、協助向有關部門遞交評審材料，在牧原、溫氏、中糧、揚翔、四川德康、大北農、金新農、上海新農、湖北金旭、湖北金龍、山西新大象、四川巨星等養豬集團公司及其他公司位于全國14個省份的72家示范基地開展了三種疫病的凈化，其中14家通過國家動物疫病凈化創建或示范場評審、年審、再評審或獲得授牌；31家通過省級動物疫病凈化創建或示范場評審或獲得授牌；6家正在申請省級動物疫病凈化創建或示范場。項目取得的成果建設三種疫病凈化示范區2個針對我國生豬養殖業中大型疫病凈化示范區缺乏等問題，開展了廣西貴港地區和湖北江夏地區豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征凈化示范區的建設探索，成功建立了廣西貴港地區豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征凈化示范區，為我國首個示范區，相關示范區的建設為在我國建設具有天然屏障的疫病凈化示范區以及大城市郊區無天然屏障的疫病凈化示范區提供了借鑒和參考。成功建立了廣西貴港地區三種疫病凈化示范區，為我國首個示范區 建設了湖北江夏地區豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征凈化示范區敬請各位批評指正謝 謝！49